本试剂盒采用间接竞争ELISA方法,在微孔条上预包被偶联抗原,样本中的孔雀石绿结晶紫和微孔条上预包被的偶联抗原竞争孔雀石绿抗体,加入酶标记物后,用TMB底物显色,样本吸光值与其所含残留物孔雀石绿结晶紫的含量成负相关,与标准曲线比较可得出相应孔雀石绿结晶紫的含量。
2. 试剂盒组成
(1) 酶标板: 96 T/8孔
(2) 标准品液:(1.0 mL/瓶)0 ppb、0.05 ppb、0.15 ppb、0.45 ppb、1.35 ppb、4.05 ppb。
(3) 酶标记物: 1瓶(12 mL)。
(4) 抗体工作液: 1瓶(7 mL)。
(5) 底物缓冲液: 1瓶(7 mL)。
(6) 底物液: 1瓶(7 mL)。
(7) 终止液: 1瓶(7 mL)。
(8) 20倍浓缩洗液:1瓶(50 mL)加蒸馏水稀释到1000 mL。
(9) 1 mg/mL标准品液:(0.2 mL)。
(10) 提取液A (50 mL)
(11) 提取液B (50 mL)
3. 需要但试剂盒中不提供的器材和试剂
(1)设备
…微孔板酶标仪(450 nm)
…均质器
…振荡器
…离心机
…各种量程的微量移液器
(2)试剂
…蒸馏水
…环已烷
5. 储存条件
(1) 2-8 ℃保存,切勿冷冻。
(2) 将不用的酶标板放进原袋中重新密封。
(3) 酶标记物和显色剂对光敏感,因此要避免直接暴露在光线下。
6. 样品处理
(1) 鱼/虾样品的准备(稀释倍数10)
先将鱼肉匀质后,称取0.5 g样品,加入500 μL的0.125 mol/L(Ph4.5)乙酸缓冲液,200ul的0.25g/mL盐酸羟胺,300ul的0.05mol/L对甲苯磺酸,震荡15分钟使之成匀浆,12000rpm离心5min,然后取上清用PBST稀释5倍,用作ELISA检测
(2) 水质样品(稀释倍数1)离心后取50µl作ELISA分析。