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本试剂盒采用间接竞争ELISA方法检测水产和鸡肉等组织样本中的AHD，在微孔条上预包被上偶联抗原，利用抗原与抗体的特异性免疫化学反应的原理来进行的，样本中的AHD和微孔条上预包被偶联抗原竞争抗呋喃妥因代谢物的衍生物抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样品中的AHD含量与样品的吸光度值呈反比，与标准曲线比较即可得出呋喃妥因代谢物含量。
二、 试剂盒技术指标：
试剂盒灵敏度： 0.1 ppb
样本检测下限：
组织、蜂蜜 0.2 ppb
鱼/虾等水产品组织因存在一定的干扰，检测下限为0.3 ppb
回收率：
鱼/虾水产组织 90%±15%
蜂蜜/鸡肉/肝脏样本 80%±15%
交叉反应率：
呋喃妥因代谢物 100%
呋喃唑酮代谢物 ﹤0.1%
呋喃它酮代谢物 ﹤0.1%
呋喃西林代谢物 ﹤0.1%
三、试剂盒组成
1．微量测试孔：96T/8孔
2．标准品液： 0 ppb、0.1 ppb、0.3 ppb、0.9 ppb、2.7 ppb、8.1 ppb（1.0 ml/瓶）
3．酶标记物 12 mL
4．抗体工作液 7 mL
5．底物缓冲液 7 mL
6．底物液 7 mL
7．终止液 7 mL
8．20倍浓缩洗涤液 50 mL
9．复溶液 50 mL
10．15.1 mg衍生化试剂
四、 所用仪器、试剂
仪器：微孔酶标仪、振荡器、离心机、天平（感量0.01 g） 各种量程微量移液器
试剂：甲醇、氢氧化钠、乙酸乙酯、正己烷、浓HCl、磷酸氢二钾、邻硝基苯甲醛、亚硝基铁氰化钾（K2Fe（CN）5·NO·3H2O）、ZnSO4·7H2O
五、样本前处理步骤
样本处理前须知
处理任何样本时，都必须注意：
1、实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要更换吸头。
2、实验之前须检查各种实验器具是否干净，必要时可对实验器具进行清洁，以避免污染干扰实验结果。
样本前处理需配制：
1、衍生化试剂 称15.1 mg邻硝基苯甲醛加甲醇10 mL溶解(浓度10 mM)
2、C液：（供奶样用）称12.5 g 亚硝基铁氰化钾用去离子水定溶至100 mL。
3、D液：（供奶样用）称29.8 g 硫酸锌用去离子水溶解定溶至100 mL。
4、0.1 MK2HPO4 称22.8 g K2HPO4·3H2O加去离子水溶解定溶至1000 mL
5、1 M HCl 取8.6 mL浓HCl加水定溶至100 mL。
6、1 M NaOH 称取4 g NaOH加水定溶至100 mL。
样本的处理
（a）鱼虾和肉样
用均质器均质样本，接(d)的描述方法。
（b）奶样
1、取出5 mL的样本到玻璃离心管中，分别加入C液和D液各250 µL；
2.、用振荡器充分混合样本,用恒温离心机4000 r/min以上离心10 min,4-12 ℃。如果没有恒温离心机，则先将样本降温至大约8 ℃，然后离心；
3、接(d)的描述方法
（c）蜂蜜
1、取1 g样本到离心管中；
2、加入4 mL的蒸馏水振荡溶解，0.5 mL 1 M HCL和100 µL衍生化试剂，充分振荡；
3、接(d)第2步描述方法。
（d）接上面的方法
1、 取1±0.05 g的均质物（鱼虾/肉样）、牛奶的离心上清液1.1 mL（相当于1 mL的奶样），分别加入4 mL的蒸馏水,0.5 mL 1 M HCL和100 µL衍生化试剂，充分振荡；
2.、在56 ℃过夜孵育（2 h）；
3、 分别加入5 mL 0.1 M K2HPO4 ，0.4 mL 1 M NaOH和5 mL的乙酸乙酯，剧烈振荡30 s；
4、 在室温下（20-25 ℃）4000 r/min以上离心10 min；
5、 取出2.5 mL的乙酸乙酯到另一个容器中于50 ℃氮气/空气吹干。
6、 用1 mL正己烷溶解干燥物，用1 mL已稀释好的复溶液充分混合；在室温下 （20-25 ℃）4000 r/min以上离心10 min；
7、 取50 µL下层用于分析。
样本稀释倍数：2
