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非蛋白巯基测定试剂盒说明书
产品编号：ZDK-012Z 规格： 100T
该产品由军事医学科学院研发监制
一、原理
二、试剂
A. 0.4M Tris 缓冲液 100ml
B. DTNB 9.9mg
C. GSH 6.1mg
D. 0.2M EDTANa2溶液 40ml
E. 10％ TCA溶液 50ml
三、试剂配制
A． 0.01M DTNB溶液：可按需要量配制，4℃保存一个月。取9.9mg DTNB溶于2.5ml无水甲醇中（甲醇自备），浓度为0.01M。
B． 2.0mM GSH溶液：按需要量配制，使用当日配制。取GSH 6.1mg，溶于10ml 0.02M EDTANa2中，浓度为2.0mM。
C． 0.02M EDTANa2溶液：使用时按需要量稀释10倍，浓度为0.02M。
四、方法
本方法适用于测定内脏组织、红细胞膜、血浆、培养细胞及亚细胞器等样品非蛋白巯基的测定。内脏组织用0.02M EDTANa2 制备10％匀浆，其它样品按常规方法制备，最后悬浮在0.02M EDTANa2 溶液中。
1. 标准曲线的制作
① 2.0mM GSH溶液，使用当日配置，4℃ 保存10天。
② 配置GSH浓度系列
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GSH（μM）
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0
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40
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80
|
120
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160
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200
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2.0mM GSH(ml)
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0
|
0.05
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0.1
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0.15
|
0.2
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0.25
|
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0.02M EDTANa2(ml)
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2.5
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2.45
|
2.4
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2.35
|
2.3
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2.25
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③ 取上述系列溶液0.5ml加入10%TCA 0.5ml,混匀，取0.5ml加入0.4M Tris 1.0ml，再加入0.01M DTNB 0.025ml,5分钟内412nm比色。
2. 非蛋白巯基的测定
取样品液0.5ml，加入10% TCA 0.5ml，间隔摇动10min，于3000rpm 离心10min。取上清液0.5ml，加入Tris缓冲液1.0ml，加入0.01M DTNB 0.025ml，5分钟内于412nm比色。
3. 计算：根据标准曲线计算样品液非蛋白巯基浓度（μM ）。
五、保存
于4℃保存1年。
