点击图片查看原图
产品编号：ZDK-010Z 规格： 100T
该产品由军事医学科学院研发监制
一、原理
GSHpx活力以单位时间内催化GSH氧化减少的量来表示，GSH和DTNB反应可生成黄色的阴离子，测定该离子的浓度，既可计算出GSH减少的量。由于GSH能进行非酶反应氧化，所以最后计算此酶的活力时，必须扣除非酶反应引起的GSH减少。
二、试剂组成
A. 叠氮钠磷酸缓冲液 40ml
B. 偏磷酸沉淀液贮存液 200ml
C. Na2HPO4溶液 150ml
D. GSH 9.21mg
E. 30% H2O2 0.5ml
F. 柠檬酸三钠溶液 30ml
G. DTNB 10mg
二、试剂配制
A. 1.0mM GSH溶液:使用当日按需要量用叠氮钠磷酸缓冲液配制。取GSH3.07mg, 加叠氮钠磷酸缓冲液10ml，为1.0mM GSH溶液。
B. 1.5mM H2O2溶液: 使用当日按需要量用30% H2O2 用双蒸水配制。取30% H2O2 15µl，双蒸水定容至100ml（自制）。
C. 0.4mg/ml DTNB显色液：按需要量用柠檬酸三钠溶液配制，4℃冰箱内可保存一月。DNTB 10mg ,加入25ml柠檬酸三钠溶液为0.4mg/ml DTNB显色液。
三、GSH标准曲线的制作
配制标夜
GSH(µm) 0 20 40 60 80 100
1.0mM GSH (ml) 0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25
偏磷酸沉淀液 (ml) 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0
双蒸水 (ml) 0.5 0.45 0.4 0.35 0.3 0.25
取上述标液0.4ml,加入Na2HPO4溶液0.5ml，再加入DTNB 0.1ml，混匀。于5min内用412nm比色，以双蒸水调零。
四、GSHpx测定举例
1. 血样制备
人血20µl或鼠血10µl，双蒸水稀释至1.0ml，4小时内测定活力。
2. 测定步骤
样品管 非酶管 空白管
1.0mM GSH 0.2 ml 0.2 ml /
血样 0.2 ml / /
双蒸水 / 0.2 ml /
37℃水浴5min
H2O2(37℃预热) 0.1 ml 0.1 ml /
37℃准确反应5min(人血)或3min（鼠血）
偏磷酸沉淀液 2.0 ml 2.0 ml /
3000rpm离心10min
取上清夜 1.0 ml 1.0 ml /
双蒸水 / / 0.2 ml
偏磷酸沉淀液 / / 0.8 ml
Na2HPO4溶液 1.25 ml 1.25 ml 1.25ml
DTNB显色液 0.25 ml 0.25 ml 0.25ml
反应1min后，412nm比色，读取OD值。依据标准曲线计算浓度。
五、保存
于2-8℃保存1年。
