谷胱甘肽过氧化物酶(GSHpx)检测试剂盒

产品编号：ZDK-010Z                                                                                                                                                                                                                                   规格： 100T

该产品由军事医学科学院研发监制

一、原理

GSHpx活力以单位时间内催化GSH氧化减少的量来表示，GSH和DTNB反应可生成黄色的阴离子，测定该离子的浓度，既可计算出GSH减少的量。由于GSH能进行非酶反应氧化，所以最后计算此酶的活力时，必须扣除非酶反应引起的GSH减少。

二、试剂组成

A.   叠氮钠磷酸缓冲液         40ml

B.   偏磷酸沉淀液贮存液       200ml

C.   Na­­­­­­­­₂HPO_4­溶液               150ml

D.   GSH                               9.21mg

E.   30% H₂O_2­                      0.5ml

F.   柠檬酸三钠溶液              30ml

G.   DTNB                            10mg

二、试剂配制

A.   1.0mM GSH溶液:使用当日按需要量用叠氮钠磷酸缓冲液配制。取GSH3.07mg, 加叠氮钠磷酸缓冲液10ml，为1.0mM GSH溶液。

B.   1.5mM H₂O₂溶液: 使用当日按需要量用30% H₂O_2­ 用双蒸水配制。取30% H₂O_2­ 15µl，双蒸水定容至100ml（自制）。

C.   0.4mg/ml DTNB显色液：按需要量用柠檬酸三钠溶液配制，4℃冰箱内可保存一月。DNTB 10mg ,加入25ml柠檬酸三钠溶液为0.4mg/ml DTNB显色液。

三、GSH标准曲线的制作

配制标夜

GSH(µm)                 0        20        40       60        80      100

1.0mM GSH  (ml)     0        0.05     0.1      0.15     0.2     0.25

偏磷酸沉淀液 (ml)   2.0      2.0       2.0      2.0      2.0      2.0

双蒸水 (ml)              0.5     0.45     0.4      0.35     0.3      0.25

取上述标液0.4ml,加入Na­­­­­­­­₂HPO_4­溶液0.5ml，再加入DTNB 0.1ml，混匀。于5min内用412nm比色，以双蒸水调零。

四、GSHpx测定举例

1.   血样制备

人血20µl或鼠血10µl，双蒸水稀释至1.0ml，4小时内测定活力。

2.   测定步骤

                              样品管           非酶管          空白管

1.0mM GSH           0.2 ml            0.2 ml             /

血样                       0.2 ml              /                  /

双蒸水                       /                0.2 ml             /

                            37℃水浴5min

H₂O₂(37℃预热)    0.1 ml           0.1 ml            /
                  37℃准确反应5min(人血)或3min（鼠血）

偏磷酸沉淀液       2.0 ml            2.0 ml           /
                               3000rpm离心10min

取上清夜             1.0 ml               1.0 ml          /

双蒸水                     /                     /            0.2 ml

偏磷酸沉淀液          /                     /            0.8 ml

Na­­­­­­­­₂HPO_4­溶液     1.25 ml              1.25 ml        1.25ml

DTNB显色液       0.25 ml              0.25 ml        0.25ml

_­反应1min后，412nm比色，读取OD值。依据标准曲线计算浓度。

五、保存

    于2-8℃保存1年。