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总巯基(TSH)测定试剂盒说明书
产品编号：ZDK-011Z 规格：100T
该产品由军事医学科学院研发监制
一、原理
二、试剂
A. 0.2M Tris缓冲液 100ml
B. DTNB 9.9mg
C. GSH 6.1mg
D． 0.2M EDTANa2贮存溶液 30ml
三、试剂配制
A． 0.01M DTNB溶液：可按需要量配制，4℃保存一个月。取9.9mg DTNB溶于2.5ml无水甲醇中（甲醇自备），浓度为0.01M。
B． 2.0mM GSH溶液：按需要量配制，使用当日配制。取GSH 6.1mg，溶于10ml 0.02M EDTANa2中，浓度为2.0mM。
C． 0.02M EDTANa2溶液：使用时按需要量稀释10倍，浓度为0.02M。
四、方法
本方法适用于测定内脏组织、血液（红细胞膜、血浆）、培养细胞及亚细胞器等样品中总巯基的测定。内脏组织用0.02M EDTANa2 制备10％匀浆，其它样品按常规方法制备，最后悬浮在0.02M EDTANa2 溶液中。
1．总巯基的测定
样品液0.25ml中加入0.75ml 0.2M Tris缓冲液，再加入0.05ml 0.01M DTNB，之后加入无水甲醇至5.0ml。试管加盖，室温间隔摇20min。室温3000rpm 离心10min，取上清液于412nm比色。
同时做试剂空白对照（无样品液）、样品空白（无DTNB）。
2．总巯基标准曲线的制作
① 2.0mM GSH溶液，使用当日配置，4℃ 保存10天。
② 配置GSH浓度系列
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GSH（um）
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0
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400
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800
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1200
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1600
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2000
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2.0mM GSH(ml)
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0
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0.2
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0.4
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0.6
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0.8
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1.0
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0.02M EDTA Na2 (ml)
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1.0
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0.8
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0.6
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0.4
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0.2
|
0
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曲线制作步骤同样品测定程序，以试剂做空白，取量完全与样品测定相同。
3. 根据标准曲线，计算样品液中GSH浓度（μM）。
五、保存
于4℃保存1年。
