一氧化氮合成酶(NOS)活性测定试剂盒

产品编号：ZDK-003Z                                                                                                                                                                                                                  规格：50T

该产品由军事医学科学院研发监制

一、原理

NOS催化L-精氨酸产生瓜氨酸和NO，瓜氨酸与氧合血红蛋白反应生成高铁血红蛋白，产生吸光度的改变。

二、试剂

1.磷酸钾缓冲液        100ml

2.缓冲液A                40ml

2.血红蛋白               20mg

(实验前需将血红蛋白需称15.48mg倒入A液，搅拌溶解，如有杂质进行过滤，一次用不完可放入-20℃保存)

3.B液                      40ml

4.C液                      40ml

(用前将标有NADPH的小管中固体全部倒入C液瓶中，搅拌溶解，可分装后－20℃保存)

5.NADPH               11.96mg

三、方法

1.   制备组织匀浆： 取组织器官(组织需用生理盐水冲洗),加入40mM pH7.2磷酸钾缓冲液10－20%（W/V）,匀浆搅拌,离心10,000转/分20min，取上清液（D液）。

2.　取A液0.8ml，C液0.8ml，D液0.6ml混合振荡，加入B液0.8ml，立即计时，振荡，比色。

3.　比色

1) 用双波长分光光度计：选择401nm和421nm，每隔30秒钟记录吸光值，计录到3min。

2）如无双波长分光光度计，可用分光光度计，先用401nm测定一个样品，再用421nm测定另一个样品，计录时间应一致，同样每隔30秒计录吸光值，共计录到3min。

注：A：用的光径为1cm比色杯。   B：对照用40mM pH7.2磷酸钾缓冲液。

四、计算

1.   NOS活性单位表示法：每克组织每分钟产生一氧化氮量（nmol）,即nmol/min每克组织。

2.   计算公式：NOS活性＝[(a-b)-(a’-b’)]×194.3

a:30秒时的401nm处的吸光值　 b :30秒时的421nm处的吸光值

a’:90秒时的401nm处的吸光值    b’:90秒时的421nm处的吸光值

注：每分钟吸光值可以任意选择时间间隔，但必须是1分钟。

五、保存

2-8℃保存，有效期半年。

六、参考文献

    1. 李 勇，罗心平，范维琥，戴瑞鸿，麝香保心丸对兔动脉壁一氧化氮代谢的影响，中国急救医学，1999,19（8）：451.