普罗赛高效细胞转染试剂盒

产品描述:
       此细胞转染试剂盒基于细胞的胞吞作用，将DNA和转染试剂形成的复合物内化进入细胞。此细胞转染使用说明书适用于6孔板的转染，如果采用其它体系进行转染，请参照下表调整转染条件。可根据实验需要分别对细胞密度、DNA用量和转染试剂的量一一进行调整从而找出转染的最佳条件。

 试剂盒成份

试剂盒保存于-20°C

标准调整表

操作方案:
1. 制备转染级质粒
    为了保证高转染效率，所用质粒需要高纯度且无内毒素。推荐采用无内毒素的质粒提取试剂盒制备。
2. 铺转染用细胞
    转染前一天（约24小时），按照5×105/毫升铺细胞,每孔3毫升。细胞的汇合度需要达到50%－70%，细胞的存活率需要达到95%以上，否则转染效率会有所下降。
3. 制备转染复合物
    制备转染复合物I: 准备两支2毫升离心管(最好使用圆底管，有利于液体混匀且不易溢出)，分别标记为A和B。
    离心管 A:
 
    注意：DNA和转染试剂的总体积不要超过40微升。
    离心管B: 2×转染缓冲液 100微升
    将A管中液体逐滴加入B管中，边加边用涡旋振荡器轻轻振荡。这个过程一定要非常缓慢，大约需要2－3分钟，否则会影响转染复合物的形成。室温静置30分钟。这个过程中不能有明显的沉淀产生，否则转染效率会有明显的下降。
    制备转染复合物II：
    将2.5微克 DNA用200 微升预先在室温下预热到25°C -37°C 的Opti MEM 或磷酸盐缓冲液（pH6.8）稀释，混匀。加入5微升 转染试剂B，涡旋震荡器振荡三次，每次3秒。室温静置15分钟。
4. 将转染复合物加入细胞
    将形成的两种复合物分别逐滴加入预先铺好的细胞的培养液中，边加边晃动培养板摇匀。继续在含有5% CO2、37°C的培养箱培养。转染后12小时更换成新鲜的培养基。

转染效率与 lipofectamine2000进行比较
             
                  普罗赛高效转染试剂盒                                                             Lipofectamine 2000