关节炎（CIA）模型的建立以及FLSs细胞的分离和鉴定

CIA是用牛II型胶原免疫诱导构建的

• 选择8周龄雄性Sprague-Dawley大鼠
• CIA建立前，采用1%戊巴比妥钠(40mg/kg)腹腔注射麻醉ink="true" href="https://www.zhihu.com/search?q=%E5%A4%A7%E9%BC%A0&search_source=Entity&hybrid_search_source=Entity&hybrid_search_extra=%7B%22sourceType%22%3A%22article%22%2C%22sourceId%22%3A441657991%7D" target="_blank" class="css-1occaib" style="color: rgb(0, 102, 255); text-decoration-line: none; cursor: pointer;">大鼠。
• II型胶原在0.05 mol/L乙酸中溶解至4mg /mL。
• 采用电动均质器，将等量的不完全弗氏佐剂乳化制备ink="true" href="https://www.zhihu.com/search?q=%E8%83%B6%E5%8E%9F%E8%9B%8B%E7%99%BD&search_source=Entity&hybrid_search_source=Entity&hybrid_search_extra=%7B%22sourceType%22%3A%22article%22%2C%22sourceId%22%3A441657991%7D" target="_blank" class="css-1occaib" style="color: rgb(0, 102, 255); text-decoration-line: none; cursor: pointer;">胶原蛋白。
• 取0.1 mL乳状液分别于第0天和第7天皮下接种ink="true" href="https://www.zhihu.com/search?q=CIA%E5%A4%A7%E9%BC%A0&search_source=Entity&hybrid_search_source=Entity&hybrid_search_extra=%7B%22sourceType%22%3A%22article%22%2C%22sourceId%22%3A441657991%7D" target="_blank" class="css-1occaib" style="color: rgb(0, 102, 255); text-decoration-line: none; cursor: pointer;">CIA大鼠。

No.2

成纤维样滑膜细胞（FLSs）的分离和鉴定

成纤维样滑膜细胞（FLSs）的分离

从CIA大鼠滑膜标本中分离ink="true" href="https://www.zhihu.com/search?q=FLSs%E7%BB%86%E8%83%9E&search_source=Entity&hybrid_search_source=Entity&hybrid_search_extra=%7B%22sourceType%22%3A%22article%22%2C%22sourceId%22%3A441657991%7D" target="_blank" class="css-1occaib" style="color: rgb(0, 102, 255); text-decoration-line: none; cursor: pointer;">FLSs细胞：

实验前采用颈椎脱位安乐死。用ink="true" href="https://www.zhihu.com/search?q=%E8%83%B6%E5%8E%9F%E9%85%B6&search_source=Entity&hybrid_search_source=Entity&hybrid_search_extra=%7B%22sourceType%22%3A%22article%22%2C%22sourceId%22%3A441657991%7D" target="_blank" class="css-1occaib" style="color: rgb(0, 102, 255); text-decoration-line: none; cursor: pointer;">胶原酶消化法获得FLSs细胞，用含1%氨苄西林和链霉素的PBS在冰上冲洗滑膜组织5次，然后将滑膜组织切片成1 mm3厚的薄片，置于含有0.2% ink="true" href="https://www.zhihu.com/search?q=II%E5%9E%8B%E8%83%B6%E5%8E%9F%E9%85%B6&search_source=Entity&hybrid_search_source=Entity&hybrid_search_extra=%7B%22sourceType%22%3A%22article%22%2C%22sourceId%22%3A441657991%7D" target="_blank" class="css-1occaib" style="color: rgb(0, 102, 255); text-decoration-line: none; cursor: pointer;">II型胶原酶的培养皿中，并放置37℃培养箱。

整个过程中，每60min收集上清，1200 rpm离心5min，收集细胞颗粒，用培养基悬浮后，完全培养基培养，后经过200目不锈钢过滤器过滤，以1*105/cm2的密度接种在细胞培养瓶中，并在5% CO2、37℃培养箱中继续培养。当达到90%融合时，传代细胞，第2代细胞用于后续实验。

成纤维样滑膜细胞（FLSs）的鉴定

用Vimentin（波形蛋白）抗体对分离得到的ink="true" href="https://www.zhihu.com/search?q=FLSS%E7%BB%86%E8%83%9E&search_source=Entity&hybrid_search_source=Entity&hybrid_search_extra=%7B%22sourceType%22%3A%22article%22%2C%22sourceId%22%3A441657991%7D" target="_blank" class="css-1occaib" style="color: rgb(0, 102, 255); text-decoration-line: none; cursor: pointer;">FLSS细胞进行鉴定，将第2代FLSS细胞接种在细胞培养板中的载玻片上。

培养3天后，除去上清液，用4％多聚甲醛固定FLSS 20 min、TritonX渗透20 min、3％H2O2处理15 min，再用5％BSA孵育20 min后，将切片与抗-Vimentin抗体置湿盒中4℃孵育过夜。

第二天用PBS 3 min×5次洗去一抗，用滤纸擦去标本外的PBS，滴加生物素化二抗工作液，室温置湿盒中孵育20 min，用PBS 5min×3次洗去二抗，用滤纸擦去标本外的PBS，DAB显色剂显色，自来水充分冲洗后进行苏木素复染，脱水，透明，中性树胶封片。