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非整合型慢病毒包装
一、非整合型慢病毒的背景
非整合型慢病毒是根据普通的慢病毒（Lent virus）载体改造而来，该载体可以将外源基因有效地转导到目的细胞上，可以在细胞质内达到瞬时表达的效果。可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，同时避免基因整合到宿主染色体造成的危害。具有低免疫性、低危害的特点。可以装载比AAV更大的DNA片段，插入片段可达8kb以上。可以轻易感染人、鼠、猴等绝大多数哺乳类细胞，是一个很好的替代传统DNA瞬时转染的基因导入方法，免除了常规DNA瞬时转染的条件摸索过程（包括转染试剂的选择及剂量比的摸索）。
非整合型慢病毒包装系统是百恩维掌握的核心技术，在国内外领先。百恩维技术团队已进行过多种目的基因的非整合型慢病毒包装，具有丰富的科研经验。现有客户包括研究所、医院、生物公司等。
二、非整合型慢病毒包装技术服务包含内容：
（一）非整合型慢病毒载体的构建：
l 将目的基因克隆构建到非整合型慢病毒载体，根据不同的研究需求，有用于基因过表达的非整合型慢病毒载体、用于RNAi的非整合型慢病毒载体、用于动物注射的非整合型慢病毒等；
（二）非整合型慢病毒包装：
- 得到的非整合型慢病毒载体，与辅助载体一起转染293T细胞进行包装；
- 将包装好的病毒超速离心收集；
- 将浓缩病毒进行滴定，滴定结果单位为TU/ml。
（三）非整合型慢病毒鉴定与质量控制：
- 测序鉴定
- 根据特定引物作RT-PCR鉴定
- 蛋白表达鉴定（根据客户要求）
三、非整合型慢病毒载体应用
l 动物体内注射
l 用于转染其他病毒难于转染的细胞，比如神经元细胞、干细胞或其它原代细胞
四、非整合型慢病毒的使用
l 表达
本产品感染细胞后，至少要培养24~48小时才能检测目的基因的表达。原因是慢病毒载体的基因组是RNA，需要反转录为DNA，并插入细胞染色体后才能表达。
l 感染细胞最佳MOI的测定
MOI（Multiplicity of Infection，感染复数）是指每个细胞感染的病毒数，通常
MOI越高，病毒整合到染色体的数量以及目的蛋白的表达量越高。对于分裂活跃的细胞
（如293细胞），MOI=1时，80%以上的细胞均表达目的基因。而对于非分裂细胞
，感染效率较低。我们建议通过比较不同MOI （比如0、1、5、10、50、100等），选择适合的MOI进行实验（可以考虑选用携带报告基因的病毒，比如Lenti-EGFP）。
五、如何避免非整合型慢病毒载体潜在的复制型和致癌的风险：
尽管非整合型慢病毒载体没有出现过任何意外，但为避免潜在的风险，操作者在实验中谨记如下原则！
所有操作均应尽量在BSL2级生物安全柜中进行，并佩戴一次性口罩和手套，尤其要避免病毒接触口、眼、鼻、耳、伤口等身体开放性区域，避免产生气溶胶，tip头一定要选择带有滤芯的。必须高度注意被污染的尖锐物品，包括针头、注射器、载玻片、移液管、毛细玻璃吸管和解剖刀。每次实验后，立即清理所有接触过病毒的器具，均应高压消毒再进行下一步处理。显微镜台、生物安全柜台面等使用后，用70%乙醇擦拭。意外洒落的含病毒的液体，用卫生纸吸干后，用0.6%次氯酸钠溶液浸泡被污染处1h。装盛非整合型慢病毒载体的实验用品，要单独放置，标示清楚。尽量避免意外洒落。对共用实验室的人员进行非整合型慢病毒安全培训或提示。
