免疫荧光实验技术服务

免疫荧光实验技术服务

荧光免疫测定技术的概念：

将试剂抗原或试剂抗体用荧光素进行标记，试剂与标本中相应的抗体或抗原反应后，测定复合物中的荧光素，这种免疫技术，称为免疫荧光素技术。

常见荧光素：
  ⑴FITC
  ⑵RB200
  ⑶TRITC
  ⑷镧系：Eu、Tb
  ⑸PE
  ⑹其它

实验步骤： 

1. 4 µ m石蜡切，60℃烤，30min。

2. 常规脱蜡至水（二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ各10min，无水乙醇，95％乙醇，85％乙醇，75％乙醇各2min）。

3. PBS洗（磷酸盐缓冲液0.01mol/L pH7.4）3×3min。

4. 0.1%胰蛋白酶（100ml蒸馏水中加入100mg胰蛋白酶，100mg氯化钙，用0.1N NaoH调pH至7.6），37℃，消化30min。（或其他修复方法）

5. 0.01mol/L pH7.4 PBS洗3×3min。

6. 兔抗人AFP1:50（用专用抗体稀释液稀释）37℃，1h或室温4h，或4℃过夜。

7. PBS洗3×3min。

8. 羊抗兔IgG-F，1:20稀释，37℃，1h，室温2h。

9. PBS洗3×3min。

10.蒸馏水洗3min。

11.pH9.0缓冲甘油封片。

12.镜检，阳性呈明亮绿色荧光。

荧光信号增强封片剂
    mowiol 40-88         4.8g
    甘油                 12ml
    蒸馏水               12ml
    0.2mol/L Tris(pH8.5) 24ml

上述混合（加热溶解），5000g离心，15min，最后加入1.4-diazobicydo-[2,2,2]-octane(DABcos)，终浓度2.5%(约1.25g)，溶解后，分装存于-20℃中。