威斯腾生物技术服务中心是一家从事生命科学研究、产品开发和实验技术服务的专业机构,目前主要从事基因诊断试剂的研发以及分子生物学、细胞生物学和免疫学相关领域的技术服务。我们的宗旨是:加强学术交流,推动科研发展,科学,严谨,求实,专业。现推出如下实验技术服务: 我中心可以为广大科研朋友提供慢病毒载体构建,腺病毒载体的构建,腺病毒的扩增,包装,纯化。以及慢病毒的包装和纯化。基因的过表达,以及RNAI相关的研究。 1、慢病毒的简介: Lentivirus是逆转录病毒的一种,具有逆转录病毒的基本结构和特性;能整合入宿主细胞基因组,长期表达,可用于转基因动物制备;但也有不同于逆转录病毒的组分和特性;比逆转录病毒具有更高的滴度,不仅可以感染分裂细胞,更重要的是还能感染非分裂的细胞。
2、慢病毒载体构建包装实验流程如下: 1. 根据目的基因相关信息(序列,基因序列号等),构建含有外源基因或序列的重组载体; 2. 对于测序正确的重组质粒,提取和纯化高质量(不含内毒素)的重组质粒; 3. 使用高效重组载体和慢病毒包装质粒共转染293T 细胞,进行病毒包装并收集上清液; 4. 通过超滤和超速离心浓缩和纯化病毒; 5. 用病毒液感染293T细胞,测定病毒滴度; 用高质量的病毒液感染靶细胞,通过定量PCR或者Westenblot检测目的基因表达,也可以进一步进行稳定细胞株的筛选用于长期的功能学研究。 3、 RNAi与慢病毒载体技术服务: 近年来的研究表明,将与mRNA对应的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA(dsRNA)导入细胞,可以使mRNA发生特异性的降解,导致其相应的基因沉默。这种转录后基因沉默机制(PTGS)被称为RNA干扰(RNAi)。通过构建RNAi表达载体制备shRNA(发卡结构小干扰RNA),已成为进行RNA干扰实验的常用手段之一。 而目前为了感染原代细胞和难感染的细胞系或者在动物水平进行RNAi,研究科学家更多的选择了慢病毒载体。在RNAi的研究中,为了感染原代细胞和难感染的细胞系,科学家开始借助于病毒载体实现RNAi;由于慢病毒可以同时感染分裂和非分裂细胞、整合性以及免疫原性低等优点,目前在RNAi的研究中,基于慢病毒构建的shRNA被最广泛的使用。
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