慢病毒载体构建，包装，纯化

Lentivirus是逆转录病毒的一种，具有逆转录病毒的基本结构和特性；能整合入宿主细胞基因组，长期表达，可用于转基因动物制备；但也有不同于逆转录病毒的组分和特性；比逆转录病毒具有更高的滴度，不仅可以感染分裂细胞，更重要的是还能感染非分裂的细胞。 　　

利用Lentivirus构建的shRNA表达载体，与化学合成的siRNA和基于瞬时表达载体构建的shRNA相比，一方面可以替代后者，另一方面，Lentivirus-shRNA载体经包装系统包装后，可用于感染依靠传统转染试剂难于转染的细胞（如原代细胞、悬浮细胞等），并且在感染后可以整合到受感细胞的基因组，进行长时间的稳定表达，是制备稳定表达shRNA细胞株和进行体内实验(in vivo)的最有效手段。　　

慢病毒载体构建包装实验流程如下

1. 根据目的基因相关信息（序列，基因序列号等）获取目的基因；

2. 选择符合实验要求的载体；

3. 将目的基因构建到慢病毒载体获得含有目的基因的重组载体；

4. 对于测序正确的重组质粒，提取和纯化高质量（不含内毒素）的重组质粒；

5. 使用高效重组载体和慢病毒包装质粒共转染293T 细胞，进行病毒包装并收集上清液；

6. 通过超滤和超速离心浓缩和纯化病毒；

7. 使用病毒液感染293T细胞，测定病毒滴度。

服务项目和服务周期

项目                                                                                      时间

目的基因过表达慢病毒颗粒制备    

1．慢病毒转导颗粒：2×108 TU （滴度1×108-1×109TU/ml）    6-8个工作周

2. 慢病毒转导颗粒：5×108 TU （滴度1×108-1×109TU/ml）     6-8个工作周

3. 慢病毒转导颗粒：1×109 TU （滴度1×108-1×109TU/ml）     6-8个工作周

服务价格           欢迎来电详询