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IP 和Co-IP服务

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品牌: biosice
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所在地: 北京
有效期至: 长期有效
最后更新: 2014-12-29 09:37
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公司基本资料信息
详细说明
  免疫沉淀Immunoprecipitation, IP)是利用抗体特异性反应纯化富集目的蛋白的一种方法。抗体与细胞裂解液或表达上清中相应的蛋白结合后,再与蛋白A/G(ProteinA/G)或二抗偶联的agarose或Sepharose珠子孵育,通过离心得到珠子-蛋白A/G或二抗-抗体-目的蛋白复合物,沉淀经过洗涤后,重悬于电泳上样缓冲液,煮沸5-10min,在高温及还原剂的作用下,抗原与抗体解离,离心收集上清,上清中包括抗体、目的蛋白和少量的杂蛋白。

 

    免疫共沉淀(Co- Immunoprecipitation, Co-IP)是利用抗原和抗体的特异性结合以及细菌的Protein A或G特异性地结合到免疫球蛋白的Fc片段的现象开发出来的方法。其基本原理是,在细胞裂解液中加入抗兴趣蛋白的抗体,孵育后再加入与抗体特异结合的结合于Agarose珠上的Protein A或G,若细胞中有与兴趣蛋白结合的目的蛋白,就可以形成这样一种复合物:“兴趣蛋白—抗性蛋白抗体—Protein A或G—Agarose珠”,经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,复合物又被分开。然后经免疫印迹或质谱检测目的蛋白。这种方法得到的目的蛋白是在细胞内与兴趣蛋白天然结合的,符合体内实际情况,得到的结果可信度高。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合;也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。

优点

(1)相互作用的蛋白质都是经翻译后修饰的,处于天然状态;

(2)蛋白的相互作用是在自然状态下进行的,可以避免人为的影响;

(3)可以分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。

缺点

(1)可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质-蛋白质相互作用;

(2)两种蛋白质的结合可能不是直接结合,而可能有第三者在中间起桥梁作用;

(3)必须在实验前预测目的蛋白是什么,以选择最后检测的抗体,所以,若预测不正确,实验就得不到结果,方法本身具有冒险性。

(4)灵敏度没有亲和色谱高。

服务要求

   提供新鲜样本材料和IP及WB的一抗(或由我公司代购)

注:免疫共沉淀(co-IP)通常必须使用未经冻存的新鲜蛋白样品。普通的免疫沉淀虽然可以使用冻存的蛋白样品,但也宜用新鲜的蛋白样品为佳。

服务基本流程

   1. 裂解样品,准备蛋白样品;

   2. 准备抗体-Protein A/G beads;

   3. 样品,抗体-Protein A/G bends共孵育;

   4. 洗脱;

   5. WB检测。

服务报告内容

   WB胶片,PVDF膜,和实验报告。

服务项目与价格:

 

 项目  说明  价格  周期
 IP(免疫沉淀)  提供蛋白样品,做IP和一个WB检测  7000元/蛋白  20个工作日
 co-IP(免疫共沉淀)  提供蛋白样品,做Co-IP和2个WB检测  7000元/蛋白  20个工作日
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