实验流程
1.miRNA提取。
2.利用加尾法将RNA逆转录成cDNA。
3.随机选择一个样品进行预实验,筛选引物,优化程序。
4.荧光定量PCR正式试验。
5.提交报告,原始Ct值。
服务内容
1.相对定量:以U6 或5S rRNA为内参,检测样本中相关miRNA的相对表达量。
2.绝对定量:以化学合成的miRNA成熟链为标准品,做5个或5个以上梯度点的稀释后制作标准曲线,通过标准曲线对样品进行相关miRNA绝对定量检测。
样品要求
材料种类 |
样品要求 |
起始量 |
保存及运输方式 |
血液 |
新鲜血液及抗凝剂处理的全血 |
1ml |
加入Trizol-80℃贮存,干冰运输 |
培养细胞 |
离心收集的细胞 |
1x107 |
|
动物组织 |
一般材料 |
100mg |
-80℃或者液氮贮存,干冰运输 |
植物 |
一般材料 |
100mg |
|
RNA |
OD260/OD280在1.9-2.1之间,完整性好 |
>5ug |
-80℃贮存,干冰运输 |
终产品
相应引物(加尾法上游引物和通用引物;茎环法引物)及序列。
完整实验报告。
服务说明
客户需提供miRNA的准确名称或登录号(miRNA数据库http://www.mirbase.org/)。
服务价格
客户可以根据需求选择不同的检测的方法进行检测,如果没有提出特定的检测方法,本公司首先选择加尾法进行检查,如果检测结果不理想与客户商谈换用其他方法进行检查,检测费用按相应检测方法收取。