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CCK8实验心得-实验方法_MedChemExpress

   日期:2018-03-26     来源:MedChemExpress     浏览:42     评论:0    
核心提示:Cell Counting Kit-8,简称CCK-8试剂盒或CCK8试剂盒,是一种基于WST-8而广泛应用于细胞活性和细胞毒性检测的快速、高灵敏度试剂盒。
产品概述
Cell Counting Kit-8,简称 CCK-8 试剂盒,是一种基于 WST-8 而广泛应用于
细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度、无放射性的比色检测试剂盒。
CCK-8 溶液可以直接加入到细胞样品中,不需要预配各种成分。WST-8 在
电子耦合试剂存在的情况下,可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色
的formazan  。细胞增殖越多越快,则颜色越深;细胞毒性越大,
则颜色越浅。对于同样的细胞,颜色的深浅 (生成的 formazan 量) 和细胞数
目呈线性关系

计算公式

细胞存活率=[(As-Ab) / (Ac-Ab)] × 100%
抑制率=[(Ac-As) / (Ac-Ab)] × 100%
As: 实验孔吸光度 (含细胞、培养基、CCK-8 溶液和药物溶液) ;
Ac: 对照孔吸光度 (含细胞、培养基、CCK-8 溶液,不含药物) ;
Ab: 空白孔吸光度 (含培养基、CCK-8 溶液,不含细胞、药物) 。

Cell line : HEK293
Medium : DMEM, 10% FBS
Incubation : 37°C, 5% CO2, 2 hours

Cell line : U87, SK-HEP1
Medium : DMEM, 10% FBS
Chemicals : 200 μM Cisplatin (DDP)
Incubation : 37°C, 5% CO2, 2 hours

注:如果待测药物有氧化性或还原性,可在加入 CCK-8 之前更换新鲜培养
基,去掉待测药物的影响。当待测药物影响比较小的情况下可以不更换培
养基,直接扣除培养基中加入待测药物后的空白吸收即可。
WST-8 是 MTT 的一种升级替代产品,和 MTT 或其它 MTT 类似产品,如
XTT、MTS 等相比有明显的优点。第一,MTT被线粒体内的一些脱氢酶还原
生成的 formazan 不是水溶性的,需要有特定的溶剂来溶解;而 WST-8 和
XTT 、MTS 产生的 formazan 都是水溶性的,可以省去后续的溶解步骤。第
二,WST-8 产生的 formazan 比 XTT 和 MTS 产生的 formazan 更易溶解。
第三,WST-8 比 XTT 和 MTS 更加稳定,使实验结果更可靠。第四,WST-8
和 MTT、XTT 等相比线性范围更宽,灵敏度更高,并且更加稳定。
WST-8 对细胞无明显毒性。加入 CCK-8 溶液显色后,可以在不同时间反复
用酶标仪读板,检测时间更加灵活,便于确定最佳测定时间。
 
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