实验原理

本试剂盒采用免疫竞争法检测环丙沙星。微孔板上包被有抗环丙沙星抗体。加入环丙沙星酶结合物和环丙沙星标准品或样品，游离环丙沙星与环丙沙星结合物竞争微量反应板上的抗环丙沙星抗体，没有结合的酶结合物被洗去。再向反应孔中加入相应反应底物TMB，作用一定时间后，结合的酶结合物将TMB转化为蓝色，转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的环丙沙星呈负相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

试剂盒组成及试剂配制

1.         已包被兔抗三聚氰胺抗体的酶联板(Assay plate )：一块（96孔）。

2.         标准品（Standard）：2×100ul/瓶。

3.         样品稀释液(Sample Diluent)：1×20ml/瓶。

4.         辣根过氧化物酶标记环丙沙星结合物（HRP - CPFX）：1×100ul/瓶（1：100）。

5.         辣根过氧化物酶标记环丙沙星结合物稀释液（HRP –CPFXDiluent）：1×10ml/瓶。

6.         底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。

7.         浓洗涤液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。

8.         终止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H₂SO4）。

需要的试剂和器材

1.         标准规格酶标仪

2.         高速离心机

3.         电热恒温培养箱

4.         超声清洗器

5.         离子交换小柱（PCX）

6.         氮气吹干仪

7.         干净的试管和Eppendof管

8.         系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，最好用多通道移液器

9.         蒸馏水，容量瓶等

样品制备：

牛奶不需要处理；肉、鱼、虾等需均质、提取、离心、稀释。

标本的稀释原则：

首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量，确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内，检测的结果才是准确的。稀释的过程中，应做好详细的记录。最后计算浓度时，稀释了“N”倍，标本的浓度应再乘以“N”。

标准品的稀释原则：2瓶，每瓶浓度为500 ng/ml，以样品稀释液做系列倍比稀释，分别稀释500 ng/ml，250 ng/ml， 125 ng/ml，62.5 ng/ml，31.2 ng/ml，15.6 ng/ml，7.8 ng/ml。样品稀释液直接作为标准浓度0 ng/ml。

辣根过氧化物酶标记环丙沙星结合物的稀释原则：