RT －PCR实验技术服务
RT-PCR 技术简介 :
逆转录-聚合酶链反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR)的原理是：提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo（dT）或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增，而获得目的基因或检测基因表达。RT-PCR使RNA检测的灵敏性提高了几个数量级，使一些极为微量RNA样品分析成为可能。该技术主要用于：分析基因的转录产物、获取目的基因、合成cDNA探针、构建RNA高效转录系统。
RT － PCR 步骤：
1、RNA提取并除去RNA中的基因组DNA污染
2、第一链cDNA的合成
3、用目的基因的上下游引物进行PCR反应
4、琼脂糖上进行凝胶电泳
5、成像分析软件Quantity One进行半定量
PCR 条件的优化：
PCR条件的优化主要是①引物退火温度的调节，一般在引物设计软件推荐温度的上下2 ℃变化寻找最佳退火温度。②此外Mg2＋浓度的调节也非常重要，通常最佳浓度为2mM左右。③引物和模板的量等。
 
耗材与实验相关仪器：
1、移液枪：1ml、200μl、20μl、10μl、2μl      2、吸头：1ml、200μl、20μl
3、匀浆管：5ml                             4、吸头台：放置1ml吸头的一个，放置20μl吸头的一个
5、EP管：1.5ml、0.2ml、100μl               6、试剂瓶：2个60ml的棕色试剂瓶（广口，带盖）
1个125ml的白色试剂瓶（放无水乙醇）      7、量筒：50ml、250ml、500ml
8、容量瓶：250ml、500ml、1000ml            9、试管架：5ml、1.5ml、20μl
10、盐水瓶：250ml、500ml各2个备用，一个装无水乙醇，另一个装DEPC水
11、铝制饭盒：4个                       12、塑料小饭盒：1个
13、大瓷缸：2个                         14、锡泊纸：一卷
15、卷纸：2卷                           16、三角烧瓶：带盖，稍大
主要仪器设备
Sigma 3-18K高速冷冻离心机         德国Sigma公司
ABI 2720型PCR仪                   美国ABI公司
Bio-Rad PowerPac Basic电泳仪        美国Bio-Rad公司
192型Sub-Cell 电泳槽               美国Bio-Rad公司
ZKU-B120超低温冰箱               中国生命科技股份有限公司
Bio-Rad 全自动凝胶成像系统        美国Bio-Rad公司
Millipore 超纯水系统              美国MILLIPORE公司
微量移液枪                        Eppendorf公司
Bio-Rad核酸蛋白测定仪             美国Bio-Rad公司
实验要求：

服务承诺：
1.本公司会在最短的时间内快速将实验完成。      2.本公司保证检测结果准确、客观、可信。
3. 本公司保证不对外公开或不向第三方提供客户相关信息。
结果提供：