对于因养狗而打喷嚏流眼泪的过敏人群来说，CRISPR基因编辑技术或许带来了一线曙光。生物技术公司Kindred Companion Sciences（美国纽约）利用CRISPR-Cas9编辑与体细胞核移植技术，成功培育出两只健康的比格犬幼犬，分别命名为Alfie和Bailey，它们携带Can f 1基因突变——该基因编码一种主要的犬过敏原。

技术路线与验证

研究团队使用CRISPR-Cas9对犬原代成纤维细胞进行工程化改造，在Can f 1基因第1外显子中引入1个碱基对的插入，造成移码突变。随后将这些细胞用于体细胞核移植，并将胚胎移植到雌性比格犬体内，最终于2024年9月诞生了两只雌性幼犬。通过PCR扩增和Sanger测序对唾液样本DNA进行基因分型，确认了Can f 1基因的成功插入；全基因组测序未检测到脱靶编辑。

为评估Can f 1蛋白的缺失情况，研究人员采集了编辑犬以及一只野生型比格犬、一只标准贵宾犬和一只金毛贵宾犬的唾液样本。后两者通常被认为属于低致敏品种。SDS-PAGE和Western blot分析显示，编辑比格犬中该蛋白完全缺失，而所有对照犬中均可检测到。

多来源暴露验证与人体测试

由于接触Can f 1也可能通过犬的毛发和皮屑发生，研究人员还分析了相同动物的这些提取物，同样在编辑犬样本中未发现信号。这些发现证实了编辑犬在多种暴露来源中均丧失了Can f 1的产生，同时也表明所谓的“低致敏”品种仍然表达这种主要过敏原。

那么这对人类过敏意味着什么？团队对一名已致敏的人类志愿者进行了皮肤点刺试验。他们将上述所有犬的唾液和皮屑样本与生理盐水和组胺进行比较，后者分别作为阴性和阳性对照。CRISPR编辑犬的提取物未引发炎症反应，而对照犬样本则出现了强烈的反应性。

此外，两只幼犬均接受了常规兽医检查，未表现出临床上明显的健康或行为异常。研究作者总结道：“总之，这些发现证明了通过靶向基因组编辑消除主要犬过敏原且无明显不良反应的可行性。”

商业化前景

在低致敏犬实现商业化之前，仍有大量研究需要完成；不过，这项研究让我们离这一目标更近了一步。Kindred公司首席执行官Matt Walker评论道：“我们希望Alfie和Bailey将成为众多Kindred犬中的第一对，我们将谨慎而负责任地朝着下一代伴侣动物迈进。作为一个与犬过敏共同生活的人，这项工作对我而言意义深远。我人生的大部分时间都以为自己永远不会养狗，但我已经和Bailey一起生活了近两年。她是一只快乐、健康且非常可爱的狗，每天都提醒我这项工作为何重要。”

来源：BioTechniques（英文原文，生物航编译，内容以原文为准）