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货号 |
产品 |
规格 |
存储 |
效期 |
| M036 |
维生素B12测定用培养基 |
100g |
干粉：8°C下密闭保存，理想是置于干燥器中。 请使用新鲜制备的培养基。 |
30个月 |
原理
乳酸杆菌生长需要特别的营养，因而在非选择性培养基上很难生长。维生素测定用培养基用于维生素的微生物法测定。该方法需要三种培养基：即维持培养基，用于保持菌种活力；接种培养基，用于测试菌液的制备；测定用培养基，用于待测维生素的定量。
维生素B12测定用培养基，不含维生素B12，但包含所有其他维生素和必要养分，用于莱士曼乳酸杆菌（ATCC 7830）的生长。莱士曼乳酸杆菌（ATCC7830）作为测定用菌，最早由Capp等人描述（1）并被美国药典和美国分析化学家协会（AOAC）所推荐（2，3）。
用已知稀释度的维生素B12标准品，可以制备标准曲线（2，3）。
测试菌液的制备是将将活化后的菌株接种到乳酸杆菌肉汤培养基中，推荐在37°C 孵育24 小时，再离心、清洗、重悬于10 ml 生理盐水中，再通过浊度分析或酸度分析，确定生长反应。用维生素B12的浓度及对应的吸光度制作标准曲线。用标准曲线可确定待测样本中的维生素B12的浓度。
应非常小心地避免培养基和玻璃器具的污染。应使用洁净的无去污剂的玻璃器具。少量的外源物质的污染可能导致错误的结果。
用于接种的测定菌应在专用的培养基中培养。
应用
维生素B12测定用培养基推荐采用莱士曼氏乳酸杆菌（ATCC 7830）作为测定用菌，进行维生素B12的微生物法测定。
培养基组分
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成分 |
克/升 |
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无维生素酸水解酪蛋白 |
15.000 |
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葡萄糖 |
40.000 |
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天门冬酰胺 |
0.200 |
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醋酸钠 |
20.000 |
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抗坏血酸 |
4.000 |
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L-胱氨酸 |
0.400 |
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DL-色氨酸 |
0.400 |
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硫酸腺嘌呤 |
0.020 |
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尿嘧啶 |
0.020 |
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黄嘌呤 |
0.020 |
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核黄素（维生素B2） |
0.001 |
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盐酸硫胺素 |
0.001 |
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生物素 |
0.00001 |
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烟酸 |
0.002 |
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对氨基苯甲酸（PABA） |
0.002 |
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泛酸钙 |
0.001 |
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盐酸吡哆醇 |
0.004 |
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盐酸吡哆醛 |
0.004 |
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盐酸吡哆胺 |
0.0008 |
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叶酸 |
0.0002 |
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磷酸二氢钾 |
1.000 |
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磷酸氢二钾 |
1.000 |
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硫酸镁 |
0.400 |
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氯化钠 |
0.020 |
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硫酸亚铁 |
0.020 |
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硫酸锰 |
0.020 |
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聚山梨酯80 |
2.000 |
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盐酸鸟嘌呤 |
0.020 |
最终pH值 (25°C) 6.1±0.2
质量控制
外观——奶油色至黄色，具均匀性，倾向形成可容易分解成粉末状的软块
制备好的培养基颜色和透明度——淡琥珀色透明溶液，可能有轻微沉淀
配比浓度——在25°C下8.5%w/v(8.5g/100ml水）水溶液，pH值为6.1±0.2
pH值——5.90-6.30
配置
称取8.45g干粉培养基溶于100ml蒸馏水，必要时加热使培养基完全溶解。混匀，使轻微的沉淀均匀分布。测定时，分装试管，每管为5ml培养基（包含标准品和待测样品）。加蒸馏水，使总体积达到10ml。高压消毒15磅121°C 5分钟。立即冷却培养基。每个试管(10 ml)的维生素B12水平为0、0.025、0.05、0.075、0.1、0.125、0.15、0.2 ng时，均可获得满意结果。
培养反应
进行微生物法测定维生素B12。采用莱士曼氏乳酸杆菌（ATCC7830），35-37°C孵育18-24小时。
生长状况
随着测定管标准品水平升高，（美国药典维生素B12标准水平，0，0.025，0.050，0.075，0.1，0.125，0.150，0.2ng)，目标菌生长逐渐递增，伴随着620nm处吸光度的增加。
参考文献
1. Capps B. E., Hobbs M. H. H. and Fox S. H.,1949, J. Biol. Chem., 178:517.
2. The UnitedStates Pharmacopoeia, 2006, USP29/NF24, The United States PharmacopeialConvention, Rockville, MD.
3. H. Williams, (Ed.), 2005, Official Methods of Analysisof the Association of Official Analytical Chemists, 19th Ed., AOAC,Washington,D.C
产品引用文献
