北京睿基恒科技发展有限公司

免疫印迹（Western Blot）技术服务
 
◇服务内容：
    提供全套免疫印迹服务，从蛋白质提取、蛋白质定量到WB实验、结果分析整理、实验报告生成。客户只需将待测样品来源、检测指标、样品数量等信息告知本公司，并提供足够量的样品、抗体（若无抗体，本公司可以提供或代购）等。具体实验实验内容如下：
1.蛋白质抽提
a.实验对象为组织样品，取适量（250~500mg）新鲜组织样品或正确保存的组织样品，加1ml含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试剂（或核蛋白抽提试剂），匀浆后抽提总蛋白（或核蛋白）。
b.实验对象为细胞样品，每份样品取1×10⁶～1×10⁷细胞，PBS清洗细胞，去PBS加0.1ml~1ml含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试剂（或核蛋白抽提试剂）抽提总蛋白（或核蛋白）。
2.蛋白质定量
用BCA法测定样品浓度。
3.免疫印迹实验

◇质量保证：

基于多年的技术服务经验、完善的实验设备、熟练的实验技能以及广大客户的良好反馈，我们承诺给客户良好而真实的WB结果。如果您对实验结果不太满意或存有疑问，我们可以免费为您重复一次！

◇服务流程：
预实验
为了保证实验结果，原则上每个WB实验均需进行预实验，以检测抗体质量和客户的样本情况。由于抗体的质量对于实验的成败至关重要，建议选用有质量保证的品牌抗体。
具体流程如下：
1．客户提供样品，我们将样品进行一定处理，做蛋白含量测定，确定合适的上样量。
2．根据客户提供的一抗和客户提供的样本做目的蛋白和内参蛋白（如β-actin）的检测，确定抗体的合适反应条件（通常一抗稀释度在1：200到1：20000之间）。若摸索出合适的反应条件，则进入正式实验。通常预实验在一到两个星期内完成。
 
正式实验
根据预实验摸索的实验条件，逐步分阶段进行正式实验，同时随时通知客户实验进程，以便于客户进行实验调整。
 主要实验步骤如下：

1. 蛋白质抽提（根据蛋白质性质不同，如膜蛋白或核蛋白等，采取不同的蛋白提取方法）；

2. 蛋白质定量：按BCA法测定样品中蛋白浓度；

3. 变性聚丙烯酰胺不连续凝胶电泳(SDS-PAGE)：将准备好的样品液和生物素标记的蛋白质分子量标准分别上样，标准加进第一个孔中，电泳分离蛋白；

4. 将SDS-PAGE胶中分离的蛋白质转移到硝酸纤维膜或PVDF膜（根据不同目的蛋白的分子量大小，选用不同的转膜条件）；

5. 膜的封闭和抗体孵育；

6. 化学发光法检测：将A和B两种试剂等体积混合，均匀的加在膜上。数分钟后使用化学发光凝胶成像仪进行曝光，拍照；

7. 数据分析：根据曝光图像上目的蛋白和内参蛋白的灰度值，来计算样品中目的蛋白的相对含量；

8. 提供实验报告，包括详细的实验方法及免疫印迹实验结果的相关图表。通常正式实验在一个星期左右完成。

◇服务方提供：

蛋白显色图谱及实验结果报告；验收标准：蛋白显色图谱，条带清晰，内参蛋白条带基本一致。

◇收费标准

注：每张膜可做的样品数最大为8个；对于在本公司购买抗体的客户，可适当给予优惠，具体优惠情况可与北睿科技工作人员协商。

实验具体收费、标本的收集、实验试剂的定购等事宜，请联系北睿科技。
实验预约热线：010-62385193  13901310800
实验预约邮箱：rigorbio@163.com

为您的实验室提供优质的技术服务，保证实验结果真实有效！

北睿科技是一家集研发，销售，技术服务为一体的生物公司，坐落于北京市北二环西直门地区，服务于全国各大医院，学校，科研院所。