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CCK-8试剂中含有WST–8:化学名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐,它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪 硫酸二甲酯(1-Methoxy PMS)的作用下被细胞线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲臜产物(Formazan)。生成的甲臜物的数量与活细胞的数量成正比。用酶联免疫检测仪在450nm波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量。该方法已被广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞增殖试验、细胞毒性试验以及药敏试验等。
优点
CCK-8试剂盒1、使用方便,省去了洗涤细胞,不需要放射性同位素和有机溶剂;2、检测快速;3、灵敏度高,甚至可以测定较低细胞密度;4、重复性优于MTT;5、对细胞毒性小;6、为1瓶溶液,毋需预制,即开即用。
缺点
1、与MTT相比,CCK-8和XTT的价格比较贵。2、CCK-8试剂的颜色为淡红色,与含酚红的培养基颜色接近,不注意的话容易产生漏加或多加。
专利
Cell Counting Kit-8(CCK-8试剂盒)是由日本同仁化学研究所(Dojindo)开发的检测细胞增殖、细胞毒性的试剂盒,为MTT法的替代方法,试剂盒中采用自己开发的水溶性四唑盐-WST-8,在日本,美国,欧洲等国家地区均持有专利,同仁化学研究所于2006年在中国获得了WST-8的注册商标。
CCK-8法与普通的MTT法相比,具有显著特点:
★灵敏度高,数据可靠,重现性好
★操作简便,省时省力
★水溶性,不需要换液,尤其适合于悬浮细胞
★无需放射性同位素和有机溶剂,对细胞毒性低
★为1瓶溶液,毋需预制,即开即用
★适合于高通量药物筛选
CCK-8用途:药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验