北京正旦国际科技有限责任公司

产品编号：ZDK-008Z                                                                                                                                                                                                                                      规格：4ml

该产品由军事医学科学院研发监制

一、原理

含有多聚组氨酸的蛋白质或多肽可以与Ni²⁺螯合物结合，用适当的缓冲液冲洗去除杂蛋白后，再用可溶性竞争性螯合剂咪唑洗脱回收含有多聚组氨酸的靶蛋白。

二、试剂

A.       层析柱                      1根                      

B. Ni²⁺螯合琼脂糖凝胶4B   4ml

C. 硫酸镍                            5g     

D. 咪唑                               6g      

E. EDTA                            10g

三、纯化方法

1．取2ml Ni²⁺螯合琼脂糖凝胶4B装柱，凝胶自然沉降。

2．用5倍柱床体积的水洗层析柱，再用5倍柱床体积的结合缓冲液（20mmol/L磷酸盐缓冲液,500mmol/L NaCl,pH 7.8）平衡层析凝胶柱。

3. 将适量细胞裂解液（20mmol/L磷酸盐缓冲液,500mmol/L NaCl,pH 7.8）12000g离心，取上清，上样，流速为0.1ml/min。

4．用5-10倍柱床体积的结合缓冲液洗层析柱，流速0.1ml/min。

5．分别用含不同浓度咪唑的洗脱缓冲液进行分段洗脱，流速0.1ml/min，收集各洗脱峰。（咪唑的浓度一般为10、20、50、100、150、200mmol/L，依据不同融合蛋白而不同）。

6．SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析组氨酸标签融合蛋白纯度。

四、再生

1．用2倍柱床体积的0.2mol/L乙酸洗层析柱，再用5倍柱床体积的水洗层析柱。

2．用5倍柱床体积50％乙醇层析柱，再用5倍柱床体积的水洗层析柱。

3．用5倍柱床体积的0.1mol/L EDTA洗层析柱，再用5倍柱床体积的水洗层析柱。

4．用2倍体积的0.1mol/L 硫酸镍洗层析柱，再用5倍柱床体积的水洗层析柱。

五、保存

2-8℃下保存一年。