产品编号:ZDK-005Z 规格:100T
该产品由军事医学科学院研发监制
一、 原理
天然蛋白质分子中氨基酸残基不含有羰基,但活性氧在金属离子的介导下,可使氨基酸残基中自由氨基或亚氨基氧化最终生成NH3和相应羰基衍生物。羰基衍生物可和2,4-二硝基苯肼反应生成2,4-二硝基苯腙衍生物,后者在387nm处有强吸收。通过测定羰基水平可以表征蛋白质分子是否受到活性氧氧化损伤。
二、试剂组成
A. 检测缓冲液(含盐酸胍) 250ml
B. 2、2,4-二硝基苯肼试剂 25ml
三、样品制备
1. 测定每一蛋白质时需要参考有关文献分离提取该蛋白质。
2. 血清和组织液(如关节液、淋巴液)可直接测定。
3. 组织脏器总羰基测定:用20mM pH6.4磷酸缓冲液按20%(W∕V)制成匀浆,3000rpm离心10min,取上清测定。
四、测定步骤
1.取A试剂和B试剂按9:1体积混合,混合液为AB液。
2.取AB液2.5ml加入0.5ml样品液,于25℃反应30min。
3.对照设置:用2.5ml A试剂加入0.5ml样品液。
4.用分光光度计于387nm测定吸光值。
五、计算
1.蛋白质或酶羰基含量计算
计算公式:
2.体液羰基含量计算
计算公式:A3874.348
2=µMol/ml体液
3.组织羰基含量计算
计算公式=A3874.348
5=µMol/g 组织
六、注意事项及说明
1.A387为387nm处吸光值。
2.用直径为1cm比色杯比色。
3.样品蛋白质浓度要大于5mg/ml。
七、保存条件
室温保存,有效期一年。