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案例2：慢病毒介导RNAi干扰联合化学疗法在肺癌治疗中的研究
凋亡抑制蛋白xx在肺癌中的表达及其功能的研究
1. 靶向xx基因的RNA干扰对肺癌生物学功能影响的研究 1.1 构建针对XX基因的进行RNA干扰的病毒载体
1.2 将该病毒载体转染入高表达xx基因的肺癌细胞株。
实验分组为：未转染组，阴性对照组，阳性对照组（实验组）。
转染后采用免疫荧光，实时定量PCR，Western blot检测xx指标的表达变化情况，计算其抑制效率。
1.3 检测干扰前后Caspase-3, Caspase-9酶的活性情况
1.4 生物学功能检测。
(1) MTT检测细胞增殖情况
(2) 流式细胞仪检测细胞周期
(3) 流式细胞仪检测细胞凋亡
(4) TUNEL检测细胞凋亡
(5）电镜观察细胞凋亡
(6) 平板克隆实验检测细胞增殖
(7) 检测细胞侵袭转移情况
2. 干扰后肺癌细胞生物学功能的检测：
3. RNA干扰联合化疗药（自选）对肺癌生物学功能影响的研究: 3.1 构建病毒载体同上。
3.2 转染分组为：未转染组，阴性对照组，化疗药组，化疗药联合RNA干扰组
3.3 生物学功能检测。
(1) MTT检测细胞增殖情况
(2) 流式细胞仪检测细胞周期
(3) 流式细胞仪检测细胞凋亡
(4) TUNEL检测细胞凋亡
(5）电镜观察细胞凋亡
(6) 平板克隆实验检测细胞增殖
(7) 检测细胞侵袭转移情况
4．动物实验
RNA干扰动物实验
(1)将肺癌细胞注射到裸鼠（4-6周龄）皮下，同时将培养稳定生长的干扰的细胞株也注射入裸鼠上，或者当肿瘤长大后将干扰病毒直接注入裸鼠肿瘤中，裸鼠分组为：正常细胞组，阴性对照组（注射生理盐水或其他阴性对照），RNA干扰组。处理后观察后裸鼠肿瘤的生长情况。
(2)处理后观察半个月到一个月，然后将裸鼠处死，取下肿瘤标本，免疫组化，实时定量PCR，Western blot方法中 的检测目的基因的表达变化。
(3)对取下的肿瘤标本采用TUNEL检测细胞凋亡，电镜观察细胞凋亡。
5．蛋白组学和质谱分析。
将RNA干扰前后的目的细胞进行蛋白组学研究，寻找差异蛋白。找到的差异蛋白进行质谱分析后用WB来鉴定。