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单克隆抗体制备技术服务
简介：单克隆抗体（单抗）应用淋巴细胞杂交瘤技术将免疫动物的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞，通过HAT筛选，ELISA抗体检测，有限稀释克隆化，选择出具有分泌抗体功能又能无限繁殖的来源于单一B细胞的杂交瘤细胞，并产生抗体，就是单克隆抗体。单抗的最大优势是它的特异性、均一性、高效性和无限供应性。在免疫学、医学、生物学等领域的基础研究和临床医学上，包括对疾病(包括癌症)的诊断、预防和治疗等方面，均显示出巨大的生命力。
实验步骤：
1. 每种抗原免疫5只Balb/c小鼠
2. 选取ELISA效价较高的小鼠，取脾细胞与SP2/0细胞融合
3. 进行2~4次克隆化及ELISA筛选，确保杂交瘤细胞分泌抗体的稳定性
4. 抗体亚类鉴定
5. 至少选择2株杂交瘤细胞的冻存，并免费提供一年的保种服务
单抗制备标准流程：
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时间（天） |
制备步骤 |
说明 |
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1 |
初次免疫 |
每种抗原免疫5只Balb/c小鼠，抗原与弗氏完全佐剂 |
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22 |
第二次免疫 |
抗原与弗氏不完全佐剂 |
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43 |
第三次免疫 |
抗原与弗氏不完全佐剂 |
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免疫一周后取血+ELISA检测效价 |
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57 |
加强免疫 |
单独抗原 |
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三天后采血(血清做阳性对照)，取脾 |
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60 |
细胞融合 |
SP2/0骨髓瘤细胞与一只小鼠（ELISA效价较高）的脾细胞融合 |
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70-100 |
HAT选择杂交瘤细胞 |
ELISA效价检测筛选阳性细胞克隆 |
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至少进行2~4次杂交瘤细胞的亚克隆，直至细胞上清的ELISA结果阳性 率达到100%，将完成细胞建株 |
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115-120 |
亚类鉴定 |
对杂交瘤细胞株所分泌的抗体进行亚类测定 |
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120 |
冻存细胞株 |
每种抗原提供2株杂交瘤细胞 |
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121-140 |
制备腹水并纯化 |
接种细胞制备腹水、Protein A/G 纯化 |
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150 |
最终提供 |
2株杂交瘤细胞和相应Protein A/G 纯化的单抗IgG，2~5mg/株 |
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完整的技术服务报告 |
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完整实验记录 |
抗体的应用：制备的抗体可能用于ELISA、WB、IHC、IP等实验。
客户需提供的材料及信息:
· 客户需要提供2mg以上的纯化蛋白质，纯度≥90%(SDS-PAGE检测)，若带融合标签需说明并提供筛选蛋白
· 如为多肽，客户要提供两种偶联不同蛋白质的多肽各4mg，未偶联多肽1mg，偶联多肽纯度≥85%
结果提供：实验报告 免疫前血清（20µl） 免疫后血清（20µl）
抗体上清（至少3株,1ml/株） 杂交瘤细胞（3株） 抗体亚型
如需要纯化的客户增加如下结果：
纯化抗体（3株）(纯度≥90％,浓度≥1mg/ml,每株5mg） 免疫效价 抗体亲和力常数
相关说明：
A、免疫原可以为重组蛋白、天然蛋白、合成多肽、偶联小分子等。
B、客户需要承诺外的细胞株，每株价格为500元。
C、客户需要对承诺外的细胞株抗体进行纯化，价格为1500元/5mg（单独报价为1800元）。
D、如客户需要非IgG类的其他细胞株，每株价格500元，纯化费用500元/5mg（CAAS法纯化）