一、试剂盒组成、贮存、稳定性
说明书,耗材:96孔DNA制备板,96孔1.6 ml深孔板,96孔V型底板。
Buffer PCR-A:DNA结合溶液。室温密闭贮存。若出现沉淀,应于65°C温浴溶解并冷却至室温后再使用。
Buffer W2 concentrate:去盐液。使用前,根据瓶上指定的体积加入乙醇,混合均匀,室温密闭贮存。可用100%乙醇或95%无水乙醇。
Eluent:2.5 mM Tris-HCl,pH 8.5。室温密闭贮存。
二、注意事项
1. 将洗脱液或水加热至65°C,有利于提高洗脱效率。
2. DNA分子呈酸性,建议在2.5 mM Tris-HCl,pH8.5洗脱液中保存。
三、操作步骤
用户可以选择负压法或离心法。
A. 负压法
1A.正确连接负压装置,将96孔DNA制备板置于负压装置上;在PCR、酶切、酶标或测序反应液中,加3个体积的Buffer PCR-A(若Buffer PCR-A不足100 μl,加至100 μl);混合均匀后转移到96孔DNA制备板中,开启并调节负压至-25-30英寸汞柱,缓慢吸掉板中溶液。
2A.加0.3 ml Buffer W2,吸尽管中溶液。以同样的方法再用0.3 ml Buffer W2洗涤两次。
* 确认在Buffer W2 concentrate中已按试剂瓶上的指定体积加入无水乙醇。
3A.保持负压将96孔DNA制备板抽吸10 min。
4A.导流管朝下将96孔DNA制备板于长纤维性纸巾上用力拍击6次。
5A.将96孔DNA制备板置于96孔V型底板上,在膜正中央加25-30 μl水或Eluent,室温静置1 min。≥3,000×g离心5 min洗脱DNA。
B. 离心法
1B.在PCR、酶切、酶标或测序反应液中,加3个体积的Buffer PCR-A(若Buffer PCR-A不足100 μl,加至100 μl);混匀后,转移到96孔DNA制备板中,将96孔DNA制备板置于96孔1.6 ml深孔板中,1,000×g离心1 min,弃滤液。
2B.在96孔DNA制备板中,加0.3 ml Buffer W2,1,000×g离心1 min,弃滤液。以同样的方法再用0.3 ml Buffer W2洗涤一次。
* 确认在Buffer W2 concentrate中已按试剂瓶上的指定体积加入无水乙醇。
3B.将96孔DNA制备板置于96孔1.6ml深孔板中,≥3,000×g离心10 min。
4B.将96孔DNA制备板置于洁净的96孔V型底板中,在膜正中央加25-30 μl水或Eluent,室温静置1 min。≥3,000×g离心5 min洗脱DNA。