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ELISA实验图库

日期:2012-06-12    点击:1027    查看原图    全部展开
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酶联免疫吸附实验(ELISA


1971年Engvall和Perlmann发表了酶联免疫吸附剂测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)用于IgG定量测定的文章,使得1966年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法。这一方法的基本原理是:①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面,并保持其免疫活性。②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体,这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性,又保留酶的活性。在测定时,把受检标本(测定其中的抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开,最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化变为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据颜色反应的深浅刊物定性或定量分析。由于酶的催化频率很高,故可极大地地放大反应效果,从而使测定方法达到很高的敏感度。


常见的ELISA试验方法

1、双抗体夹心法(Sandwich ELISA)
主要用于测定抗原。是用于检测分子中具有至少两个抗原决定簇的多价抗原,而不能用于小分子半抗原的检测。

2.间接法(Indirect  ELISA)
主要用于测定抗体。抗原连接到固相载体上,样品中待测抗体与之结合成固体抗原-受检抗体复合物,再用酶标二抗(针对受检抗体的抗体,如羊抗人lgG抗体)与固相免疫复合物中的抗体结合,形成固相抗原-受检抗体-酶标二抗复合物,测定加底物后的显色程度,确定代测抗体含量。

3、竞争法(Competitive ELISA)
竞争法ELISA可用于抗原和半抗原的定量检测,如激素。
(1)酶标记抗原(抗体)与样品或标准品中的非标记抗原或抗体具有相同的与固相抗体(抗原)结合的能力;
(2)反应体系中,固相抗体(抗原)和酶标抗原(抗体)是固定限量,且前者的结合位点少于酶标记与非标记抗原(抗体)的分子量和;
(3)免疫反应后,结合于固相载体上复合物中被测定的酶标抗原(抗体)的量(酶活性)与样品或标准品中非标记抗原(抗体)的浓度成反比。

4.捕获法ELISA(Capturing ELISA)
主要用于血清中某种抗体亚型成份(如lgM)的测定 。以目前最常用的lgM测定为例,因血清中针对某种抗原的特异性lgM和lgG同时存在,候着可干扰lgM的测定。
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